无菌转接

（一）实验目的

通过超净工作台上的转接操作反复训练，强化的无菌转接操作技能。

（二）实验用具与材料

超净工作台、70%酒精、酒精灯、已灭菌的18cm-20cm手术弯剪、2%新捷尔灭溶液、纱布、广口瓶、记号笔、装培养瓶的篮框、污染玻璃瓶、试管刷。试管苗、盛有培养基的培养瓶。

（三）实验学时与场地

8学时，植物组培实验室

（四）实验内容

1、准备工作：

⑴在准备室肥皂洗手，换上工作服、拖鞋等。

⑵开启工作台紫外灯和房间紫外灯，10分钟后打开超净工作台的风机，开启紫外灯15分钟后关闭，风机不关。

⑶再清洁

用2%新捷尔灭擦拭双手和超净工作台台面。

2、转接操作：

⑴放置培养瓶、器械

将试管苗及培养瓶用2%新捷尔灭擦拭干净，放入超净工作台内，分作两边放置。剪刀取出后放入酒精瓶中，切忌扔在台面，使用时需用火焰灭菌5分钟。

接种器械是影响转接成功的关键因素，一定要剪刀前端、中部、正面、背面均烧到位，保证无菌。

⑵转接

左手握住新培养瓶，打开瓶盖，灼烧瓶口，同时将接种器械放入培养瓶内壁冷却。转接一瓶试管苗，每次剪取带1-2片芽和叶的茎段插入培养基中，一瓶转接入三瓶新培养基中，每瓶内试管苗均匀放置，长度一致（1-2cm）。

转接中防止污染，随时带着有菌观念，进行无菌操作，器械不能碰触超净工作台及培养瓶外侧，更不能伸出工作台外面。

3、整理清洁

转接完后，用特种笔在每瓶培养基上记录：转接的试管苗品种符号、日期、转接人，以备以后观察。

清洁台面、器械、以及无菌接种室。

4、注意事项

⑴清洁台面时，酒精不能擦拭工作台四周侧面，只能用2%新捷尔灭擦拭。

⑵接种器械必须灼烧到位，防止带菌，培养瓶口也需灼烧。

⑶转接时，手不能解除培养瓶口及试管苗，也不能接触接种器械中上部要伸进培养瓶的部位。

⑷培养瓶盖必须立放，器械不能掉落在台面上，或碰触工作台周边，如有立即换器械。

⑸操作要迅速，如培养瓶和试管苗暴露过久，污染机会增多。

⑹转接中还应注意试管苗状态，如是真菌污染苗，不能转接，细菌苗不是很严重的，视情况可转接上部。

⑺清洗器械时，注意用钢丝刷清洗掉容易藏污的地方，母瓶不用要将培养基倒出，将瓶洗净，纱布也要洗净。

（五）作业

写出实训报告，分析实践结果及体会。

（六）评分标准

无菌转接程序正确，操作熟练迅速，培养瓶内分布均匀，茎段高度一致，污染率低于5%。